Исследование микробов под микроскопом

ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОБОВ ПОД МИКРОСКОПОМ

Изготовление мазка. Для микроскопического изучения нужно исследуемую культуру микроба осторожно распределить равномерным тонким слоем по стеклу, т. е. сделать так называемый мазок. Для этой цели обычно используют предметные стекла.

Мазок готовят при помощи платиновых петель или пастеровских пипеток.

При приготовлении мазка из культур микробов, выращенных на плотных средах, поступают следующим образом: на чистое предметное стекло стерильной пипеткой или же бактериологической петлей наносят каплю стерильной воды или физиологического раствора. Прежде чем взять материал из культуры, необходимо прокалить (до покраснения) петлю в пламени горелки. Затем вынимают из пробирки ватную пробку, вводят туда петлю, охлаждают прикосновением к стенке пробирки и после охлаждения набирают незначительное количество материала (слегка прикасаются к культуре, не царапая среды петлей). После взятия материала пробирку тотчас закрывают той же ватной пробкой. Взятый материал смешивают с имеющейся на предметном стекле каплей и равномерным тонким слоем петлей растирают по его поверхности (1,5X2 см).

Если культура микробов жидкая, то петлю опускают в жидкость, захваченную каплю растирают на предметном стекле (на обратной стороне мазка обводят восковым карандашом место, где приготовлен мазок, это облегчает в дальнейшем нахождение его). После этого петлю прокаливают (убивая оставшиеся микробы па петле).

Для изготовления мазка можно воспользоваться и стерильной пастеровской пипеткой. Пастеровскую пипетку предварительно проводят над пламенем горелки, затем над пламенем горелки прокаленным пинцетом обламывают тонкий запаянный ее конец и в пипетку набирают материал. Использованную пипетку необходимо опустить в сосуд с дезинфицирующим раствором (2%-ныЙ раствор карболовой кислоты и т. п.).

Мазки из органов приготовляют следующим образом. Избранное место прижигают раскаленным шпателем (или каким-либо другим металлическим предметом), затем делают стерильным скальпелем разрез, откуда берут материал пипеткой или петлей, который тонким слоем наносят на предметное стекло. Часто делают мазки-отпечатки. С этой целью стерильными инструментами вырезают небольшой кусочек из исследуемого органа, захватывают его пинцетом и делают рядками несколько отпечатков на стекле.

Для изготовления мазков из гноя или мокроты берут небольшое количество предназначенного для исследования материала, наносят на предметное стекло, покрывают другим таким же стеклом, слегка при этом придавливают одно к другому и после этого стекла раздвигают в разные стороны. В результате получаются равноценные мазки на обоих стеклах.

Приготовленный мазок высушивают на воздухе или в термостате. Подогревать мазок не рекомендуется, так как при быстрой потере влаги происходит грубое свертывание белков и клетка теряет свою естественную форму. При высушивании мазков, особенно из патогенного материала, необходимо предохранять препарат от мух (покрывать стеклянным колпаком).

Высушенный мазок фиксируют над пламенем спиртовки. Для этого препарат берут большим и указательным пальцами и медленно проводят (намазанной стороной препарата кверху!) через пламя не менее 3 раз. В общей сложности мазок должен подвергаться действию пламени не больше 2 секунд. Длительная фиксация может изменить структуру микробных клеток, и они плохо окрашиваются, недостаточно зафиксированный мазок смывается со стекла при последующей обработке.

Фиксацией препарата преследуют цель прикрепить мазок к стеклу, убить микробов (кроме спороносных), сделать их более восприимчивыми к окраске, так как мертвый белок красится значительно лучше живого.

В тех случаях, когда требуется изучить строение бактериальной клетки, используют химические способы фиксации. В абсолютном алкоголе выдерживают мазки в течение 15-30 минут, в спирте с эфиром (смесь равных объемов) — в течение 2-5 минут, в метиловом и амиловом алкоголе — в течение 5 минут. Для фиксации погружают мазок в кюветку с одним из указанных веществ или наливают последние на мазок.

Способы окраски микробов. Чаще всего микробов рассматривают под микроскопом в окрашенном виде.

В микробиологической практике для окрашивания микробов пользуются анилиновыми красками. Эти краски органического происхождения и получаются сложной обработкой каменноугольной смолы.

Для окраски микробов применяют простые и сложные способы. При простых способах употребляется одна какая-нибудь краска. Эти способы окраски очень несложны. На подлежащий окраске препарат наливают краску, выдерживают определенное время, затем тщательно промывают препарат водой, высушивают наложением на него фильтровальной бумаги и просматривают под микроскопом.

Простым способом окраски обыкновенно пользуются для обнаружения микробов, определения их формы и величины.

При простом способе окраски на мазок (уже готовый) наносят раствор краски: метиленовой синьки, фуксина или другой, на 3-5 минут. Затем краску стряхивают и мазок обильно промывают водой. Промытый мазок просушивают фильтровальной бумагой, помещают его на предметный столик микроскопа и рассматривают при самом большом увеличении, пользуясь иммерсионным объективом микроскопа.

0

Автор публикации

не в сети 8 часов

admin

0

Все будет хорошо

Комментарии: 147Публикации: 39928Регистрация: 27-02-2009
Добавлено:7 сентября 2011 10:52

Рекламные ссылки

Комментировать

Реклама

Интересный факт

Медовый разбойник (Acherontia Lachesis) известен тем, что что имитируют запах медоносных пчел. Это им необходимо для того, чтобы проникнуть в улей невредимыми для поедания меда.